Plasmide CRISPR d'Activation (h) N-RAP: sc-408143-ACT

Le gène humain **NRAP** code **N-RAP**, une protéine d’échafaudage cytosquelettique enrichie dans les muscles striés, qui coordonne l’assemblage des myofibrilles en reliant les filaments d’actine à des structures contenant l’**α-actinine** au niveau des **disques Z** en formation et des **costamères**. Grâce à ses interactions avec des protéines sarcomériques et associées à la membrane, N-RAP contribue à l’organisation de l’architecture contractile et aux processus de mécanotransduction qui façonnent la différenciation et la stabilité des cellules musculaires. Des altérations de l’expression de **NRAP** ou des variants ont été associés à des dysfonctions des muscles cardiaque et squelettique dans des contextes génétiques et de remodelage, ce qui en fait un acteur pertinent des voies impliquées dans le maintien du sarcomère, l’adaptation au stress et les programmes géniques spécifiques du muscle. **NRAP** est donc fréquemment étudié dans des modèles de myopathie et de cardiomyopathie, ainsi que dans des systèmes explorant le remodelage du cytosquelette et la maturation musculaire.

N-RAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

N-RAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de N-RAP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de N-RAP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie N-RAP dans les cellules tumorales présentant une expression de NRAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.