Myosin VIIB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409183-ACT

Il gene umano **MYO7B** codifica la **miosina VIIB**, una proteina motrice basata sull’actina che supporta l’organizzazione del citoscheletro e i processi di trasporto intracellulare legati alla polarità cellulare e al mantenimento di domini di membrana specializzati. In quanto membro della famiglia delle miosine non convenzionali, è implicata nella dinamica dei filamenti di actina, nel traffico vescicolare e in eventi di segnalazione mediati da complessi scaffold che modellano l’architettura epiteliale. La disregolazione del trasporto actina-dipendente e delle vie della polarità è spesso studiata in contesti quali difetti della funzione di barriera e alterazioni dell’organizzazione tissutale, rilevanti per i sistemi gastrointestinale e sensoriale. La modulazione di **MYO7B** è quindi utile per analizzare come i motori dell’actina coordinino traffico, complessi di adesione e rimodellamento delle giunzioni nelle cellule umane.

Myosin VIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYO7B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myosin VIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYO7B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYO7B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myosin VIIB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYO7B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myosin VIIB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myosin VIIB nelle cellule tumorali con espressione di MYO7B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.