Myosin IXa Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407473

Visão geral

MYO9A codifica a miosina IXa, uma proteína motora não convencional baseada em actina que também contém um domínio ativador de GTPase da família Rho (RhoGAP), ligando a dinâmica do citoesqueleto à sinalização por pequenas GTPases. Por meio da regulação da remodelação de actina, da protrusão de membrana e da adesão celular, a miosina IXa contribui para a polaridade celular e a migração direcionada e pode influenciar vias dependentes de RhoA que controlam a contratilidade e a organização juncional. Essas funções posicionam o MYO9A como um nó mecanístico em processos como a morfogênese epitelial, o crescimento de neuritos e o tráfego intracelular, nos quais são necessários atividade motora coordenada e sinalização por Rho. A desregulação do controle do citoesqueleto e da sinalização da via Rho está implicada em diversas patologias humanas, tornando o MYO9A um alvo relevante para estudar alterações associadas a doenças na motilidade, na função de barreira e na sinalização morfodinâmica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Myosin IXa (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MYO9A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MYO9A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MYO9A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Myosin IXa.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MYO9A para a investigação da sinalização de Myosin IXa, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MYO9A críticos para a função Myosin IXa
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MYO9A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Myosin IXa Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Myosin IXa Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MYO9A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Myosin IXa Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Myosin IXa (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MYO9A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MYO9A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.