myoglobin Plasmide Double Nickase (m): sc-421575-NIC

Il gene Mb del topo codifica la mioglobina, una proteina contenente eme che lega l’ossigeno, arricchita nel muscolo cardiaco e nel muscolo scheletrico ossidativo, dove favorisce l’immagazzinamento e la diffusione intracellulare dell’ossigeno. Tamponando la disponibilità di ossigeno, la mioglobina aiuta a sostenere la fosforilazione ossidativa mitocondriale e a limitare lo stress metabolico associato all’ipossia durante variazioni del carico di lavoro. L’espressione di Mb e la chimica redox della mioglobina si intrecciano con la gestione dell’ossido nitrico e delle specie reattive dell’ossigeno, influenzando l’energetica muscolare e la vasoregolazione. Alterazioni dell’abbondanza o della funzione della mioglobina vengono spesso studiate in contesti di ischemia, cardiomiopatia e adattamento all’esercizio fisico, per comprendere l’omeostasi dell’ossigeno nel muscolo e le risposte allo stress.

myoglobin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mb interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.