myogenin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421806

Panoramica

Myog codifica la miogenina, un fattore di trascrizione basic helix-loop-helix (bHLH) che agisce a valle di MYOD1 e MYF5 per promuovere la differenziazione terminale del muscolo scheletrico. La miogenina si lega ai motivi E-box e coordina programmi trascrizionali che controllano l’uscita dei mioblasti dal ciclo cellulare, la formazione dei miotubi e l’attivazione di geni sarcomerici e di geni strutturali muscolari. Opera all’interno delle reti regolatorie miogeniche fondamentali e interagisce con il rimodellamento della cromatina e con input di segnalazione collegati a MAPK/PI3K che modulano l’impegno di linea. La deregolazione dei programmi trascrizionali associati alla miogenina è rilevante per studi su miogenesi compromessa, rigenerazione muscolare e meccanismi di malattie neuromuscolari in sistemi modello murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO myogenin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myog in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myog insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myog a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina myogenin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myog per lo studio della segnalazione di myogenin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myog critici per la funzione di myogenin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myog per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal myogenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal myogenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myog. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal myogenin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR myogenin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myog per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myog definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.