MYL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402798-ACT

MYL2 codifica la catena leggera regolatoria ventricolare/cardiaca della miosina 2, un componente del complesso della miosina II sensibile al Ca2+ che modula il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina e la generazione della forza contrattile nel muscolo striato. Attraverso un controllo dell’attività motoria della miosina dipendente dalla fosforilazione, MYL2 contribuisce all’organizzazione del sarcomero, alla meccanica dei cardiomiociti e alle vie di accoppiamento eccitazione–contrazione che coordinano la gittata cardiaca. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MYL2 sono implicate in cardiomiopatie ereditarie e acquisite, nelle quali una regolazione sarcomerica compromessa può influire sulla struttura e sulle prestazioni del miocardio. In quanto marcatore e regolatore della differenziazione e della contrattilità del muscolo cardiaco, MYL2 è ampiamente utilizzato negli studi sullo sviluppo cardiaco, nella modellazione di malattie e nella meccanobiologia.

MYL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYL2 nelle cellule tumorali con espressione di MYL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.