MYH7B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400621-ACT

MYH7B codifica un membro della famiglia delle catene pesanti della miosina sarcomerica, con ruoli nell’attività motoria basata sull’actina e nell’organizzazione dell’apparato contrattile nelle linee cellulari del muscolo striato. Nell’ambito della generazione di forza dipendente dalla miosina, MYH7B è funzionalmente associato alla dinamica del citoscheletro, alla trasduzione meccanochimica ATP-dipendente e a vie che mantengono l’integrità delle miofibrille e la differenziazione delle cellule muscolari. La disregolazione dei programmi genici delle catene pesanti della miosina è spesso studiata nel contesto del rimodellamento dei cardiomiociti e del muscolo scheletrico, in cui un’alterata espressione dei geni contrattili contribuisce a fenotipi patologici. MYH7B rappresenta pertanto un bersaglio utile per indagare il controllo trascrizionale dei componenti del sarcomero, le reti geniche specifiche del muscolo e i processi di rimodellamento responsivi allo stress in modelli cellulari umani.

MYH7B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYH7B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH7B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYH7B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYH7B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH7B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYH7B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH7B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH7B nelle cellule tumorali con espressione di MYH7B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.