MYH6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400351

Panoramica

MYH6 codifica la catena pesante alfa della miosina cardiaca II, una delle principali proteine motrici del sarcomero che alimenta la generazione di forza contrattile dipendente dall’actina nel muscolo striato. Attraverso il ciclo dei ponti trasversali guidato dall’attività ATPasica, MYH6 contribuisce all’organizzazione delle miofibrille, alla contrattilità sensibile al calcio e allo sviluppo del muscolo cardiaco, integrandosi con vie che regolano l’assemblaggio del sarcomero e la meccanotrasduzione. Alterazioni dell’espressione di MYH6 o varianti di sequenza sono associate a cardiomiopatie ereditarie e a fenotipi di cardiopatie congenite, a testimonianza del suo ruolo centrale nella funzione miocardica. In quanto gene contrattile arricchito in specifici tessuti, MYH6 è ampiamente utilizzato per studiare la maturazione dei cardiomiociti, le risposte allo stress e il rimodellamento strutturale in sistemi modello cellulari e genetici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MYH6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYH6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYH6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYH6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MYH6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYH6 per lo studio della segnalazione di MYH6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MYH6 critici per la funzione di MYH6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYH6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MYH6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MYH6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYH6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MYH6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MYH6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYH6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYH6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.