musculin Plasmide Double Nickase (h): sc-403242-NIC

MSC umano codifica la musculina, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix (bHLH) che regola programmi di espressione genica che controllano la specificazione di linea e la differenziazione cellulare. La musculina modula la trascrizione tramite legame al DNA dipendente dalle E-box e attraverso l’interazione con altri fattori bHLH, collegandosi così a vie di sviluppo e di destino cellulare che influenzano gli stati di proliferazione e maturazione. Un’espressione alterata di MSC è stata riportata in diversi contesti che coinvolgono differenziazione disregolata e riprogrammazione trascrizionale, inclusi fenotipi associati al cancro e cambiamenti di stato di cellule immunitarie o stromali. Queste caratteristiche rendono la musculina un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale, sull’identità cellulare e sul cross-talk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

musculin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MSC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MSC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MSC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MSC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.