mucolipin 1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430117-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mucolipin 1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mucolipin 1 Double Nickase Plasmid (m) e il mucolipin 1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mcoln1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mucolipin 1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430117-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mucolipin 1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430117-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mcoln1 codifica per mucolipina 1 (TRPML1), un canale cationico endolisosomiale permeabile al Ca2+ che regola l’omeostasi ionica lisosomiale, il traffico di membrana e le dinamiche di fusione–fissione. Accoppiando il rilascio di Ca2+ dal lume a effettori a valle, TRPML1 sostiene il flusso della via autofagia–lisosoma, il processamento del carico endocitico e l’esocitosi lisosomiale, importanti per la clearance cellulare e il sensing dei nutrienti. La segnalazione dipendente da Mcoln1 interseca le risposte allo stress lisosomiale e i programmi di trasporto vescicolare che influenzano il controllo di qualità mitocondriale e la segnalazione infiammatoria. L’alterazione della funzione di TRPML1 è associata a patologie da accumulo lisosomiale e a fenotipi neurodegenerativi, rendendo Mcoln1 un bersaglio chiave per studi meccanicistici della disfunzione endolisosomiale in modelli murini.
mucolipin 1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mcoln1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mcoln1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mcoln1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mcoln1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.