mucolipin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403931-NIC

MCOLN1 codifica la mucolipina 1 (TRPML1), un canale cationico endolisosomiale permeabile al Ca²⁺ che regola il traffico di membrana, la riformazione dei lisosomi e il flusso autofagia–lisosoma. Il rilascio di Ca²⁺ mediato da TRPML1 coordina gli eventi di fusione/scissione delle vescicole e influenza l’omeostasi ionica lisosomiale, con ricadute sul rilevamento dei nutrienti e sui percorsi di adattamento allo stress, inclusa la segnalazione di mTORC1. L’alterazione di MCOLN1 compromette la processazione del carico endocitico e i meccanismi cellulari di “clearance”, collegando la disfunzione lisosomiale alla neurodegenerazione e, più in generale, alla biologia delle malattie da accumulo lisosomiale. In quanto regolatore nodale del controllo qualità degli organelli, MCOLN1 è spesso studiato in modelli di difetti del traffico intracellulare, risposte allo stress ossidativo e segnalazione dell’immunità innata.

mucolipin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCOLN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCOLN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCOLN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCOLN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.