mucolipin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430117

Panoramica

Mcoln1 codifica mucolipina 1 (TRPML1), un canale cationico endolisosomiale permeabile al Ca2+ che regola la biogenesi dei lisosomi, il traffico di membrana e il flusso autofagico. Il rilascio di Ca2+ mediato da TRPML1 favorisce la fusione lisosoma–autofagosoma, l’elaborazione del carico endocitico e vie di segnalazione legate al sensing dei nutrienti e alle risposte cellulari allo stress. L’alterazione della funzione della mucolipina 1 compromette l’omeostasi lisosomiale, promuovendo l’accumulo di substrati non degradati e un controllo della qualità mitocondriale alterato. Mcoln1 è quindi ampiamente studiato in modelli di malattie da accumulo lisosomiale e di difetti della funzione endolisosomiale associati alla neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mucolipin 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mcoln1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mcoln1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mcoln1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mucolipin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mcoln1 per lo studio della segnalazione di mucolipin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mcoln1 critici per la funzione di mucolipin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mcoln1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mucolipin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal mucolipin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mcoln1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mucolipin 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR mucolipin 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mcoln1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mcoln1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.