Mucin 4/MUC4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400329-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mucin 4/MUC4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h) e il Mucin 4/MUC4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MUC4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Mucin 4/MUC4 Antibody (1G8): sc-33654
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mucin 4/MUC4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400329-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mucin 4/MUC4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400329-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUC4 codifica la mucina 4, una glicoproteina ad alto peso molecolare associata alla membrana, che contribuisce alla funzione di barriera epiteliale, alla lubrificazione e alla formazione del glicocalice grazie a un’estesa O-glicosilazione. In quanto mucina di superficie cellulare, MUC4 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e può modulare le reti di segnalazione dei recettori, incluse le vie associate alla famiglia ERBB, influenzando proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. L’alterazione dell’espressione di MUC4 e il rimodellamento delle sue glicoforme sono spesso studiati nel contesto della trasformazione epiteliale, di fenotipi associati all’invasione e di meccanismi di evasione immunitaria alle interfacce mucosali. Queste caratteristiche rendono MUC4 un marcatore utile e un nodo funzionale per indagare la biologia delle mucine, l’omeostasi epiteliale e il crosstalk di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.
Mucin 4/MUC4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUC4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.