Plásmido CRISPR de Activación (h) MSK2: sc-404150-ACT

RPS6KA4 codifica la quinasa activada por mitógenos y estrés 2 (MSK2), una quinasa nuclear de serina/treonina situada aguas abajo de la señalización de ERK1/2 y p38 MAPK. MSK2 fosforila reguladores de la cromatina y de la transcripción, incluida la histona H3 y factores de la familia CREB/ATF, acoplando así las señales extracelulares a la expresión de genes de respuesta inmediata y a la remodelación de la cromatina dependiente del estímulo. A través de estas actividades, MSK2 contribuye al control de programas transcripcionales inflamatorios y de respuesta al estrés, así como a la regulación de la proliferación y la diferenciación en múltiples contextos celulares. La desregulación de la señalización MAPK–MSK se ha implicado en cambios en la expresión de citocinas y en estados transcripcionales oncogénicos, lo que convierte a RPS6KA4 en un nodo útil para estudiar la regulación génica impulsada por vías de señalización.

MSK2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS6KA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MSK2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS6KA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS6KA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MSK2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS6KA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MSK2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MSK2 en células tumorales con expresión de RPS6KA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.