MS4A6A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417401-ACT

MS4A6A codifica un membro della famiglia membrane-spanning 4A (MS4A), un gruppo di proteine simili alle tetraspanine, arricchite nelle linee ematopoietiche e mieloidi. MS4A6A è frequentemente utilizzato come marcatore degli stati di attivazione di microglia e macrofagi ed è implicato nell’organizzazione della membrana e nella regolazione dei complessi di segnalazione di superficie cellulare che modellano le risposte dell’immunità innata. L’espressione di MS4A6A correla con programmi infiammatori e con vie associate all’attivazione delle cellule immunitarie, alla funzione fagocitica e a stati trascrizionali guidati dalle citochine. Alterazioni dell’espressione di MS4A6A sono state associate a fenotipi legati alla neuroinfiammazione e vengono comunemente studiate nel contesto della genetica delle malattie neurodegenerative e della biologia della microglia.

MS4A6A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MS4A6A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MS4A6A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MS4A6A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MS4A6A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MS4A6A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MS4A6A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MS4A6A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MS4A6A nelle cellule tumorali con espressione di MS4A6A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.