Particules Lentivirales d'Activation (h) MRP3: sc-401508-LAC

ABCC3 code pour le transporteur de la famille ATP-binding cassette MRP3 (ABCC3), une pompe d’efflux basolatérale qui exporte un large spectre d’anions organiques, notamment des conjugués glucuronides, sulfates et au glutathion. MRP3 soutient la détoxification de phase II en couplant la formation de conjugués à leur export cellulaire, influençant la prise en charge hépatique et intestinale des xénobiotiques, l’homéostasie des acides biliaires et les réponses au stress inflammatoire. Son activité s’inscrit au carrefour de la disposition des médicaments et des fonctions de barrière régulées par les transporteurs, faisant d’ABCC3 un nœud pertinent dans les études de voies orientées pharmacologie ainsi que dans des modèles de dysfonction hépatobiliaire, de signalisation associée à la cholestase et de phénotypes de chimiorésistance médiée par les transporteurs. Une expression dérégulée d’ABCC3 a été rapportée dans plusieurs contextes pathologiques où des flux modifiés de métabolites conjugués et l’équilibre rédox contribuent à l’adaptation cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales MRP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ABCC3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MRP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ABCC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MRP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ABCC3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.