MRP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400601-ACT

ABCC2 codifica a proteína 2 associada à resistência a múltiplos fármacos (MRP2), um transportador de efluxo da família ABC (ATP-binding cassette) localizado principalmente na membrana apical de células epiteliais polarizadas, como hepatócitos, enterócitos e células do túbulo proximal renal. A MRP2 exporta uma ampla gama de ânions endógenos e xenobióticos, incluindo conjugados de glutationa, glucuronídeo e sulfato, dando suporte à desintoxicação de fase II e à formação da bile nas vias de transporte hepatobiliar. Ao controlar o efluxo celular de metabólitos conjugados, a MRP2 contribui para o manejo do estresse oxidativo e para a homeostase química em tecidos de barreira. Alterações na expressão ou na função de ABCC2 têm sido associadas a fenótipos de excreção biliar prejudicada e à variabilidade na disposição de compostos conjugados, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos em biologia hepática e epitelial.

MRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP2 em células tumorais com expressão de ABCC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.