MRP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400456-ACT

ABCC1 codifica la proteina umana 1 associata alla resistenza multidrug (MRP1), un trasportatore della famiglia ATP-binding cassette che esporta attraverso la membrana plasmatica un’ampia gamma di anioni organici, coniugati di xenobiotici e metaboliti endogeni. MRP1 accoppia l’idrolisi dell’ATP all’efflusso di coniugati del glutatione, del glucuronide e del solfato, influenzando l’omeostasi redox cellulare, la gestione dei mediatori dell’infiammazione e la detossificazione farmacologica. Attraverso la modulazione della disponibilità intracellulare dei substrati, l’attività di ABCC1 interagisce con le risposte allo stress ossidativo e con le vie del metabolismo degli xenobiotici. Una deregolazione dell’espressione di ABCC1/MRP1 è stata associata ad alterazioni della disposizione dei farmaci e a fenotipi di resistenza nei tumori, nonché a contesti patologici che coinvolgono il trasporto nelle barriere e l’infiammazione cronica.

MRP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABCC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MRP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABCC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABCC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MRP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABCC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MRP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MRP1 nelle cellule tumorali con espressione di ABCC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.