MOBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421685

Panoramica

La proteina basica degli oligodendrociti associata alla mielina (MOBP), codificata nel topo dal gene *Mobp*, è un componente strutturale abbondante della mielina del sistema nervoso centrale prodotta dagli oligodendrociti maturi. MOBP contribuisce alla compattazione e alla stabilità della mielina ed è comunemente studiata nel contesto della differenziazione degli oligodendrociti, delle interazioni assone–glia e del mantenimento dell’integrità della sostanza bianca. L’espressione di *Mobp* è collegata ai programmi di biogenesi della mielina e ai processi di organizzazione del citoscheletro e delle membrane che supportano la formazione della guaina. Livelli alterati di MOBP e la disgregazione della mielina sono rilevanti per i meccanismi delle malattie demielinizzanti e neurodegenerative, fornendo un indicatore della patologia della sostanza bianca nei modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MOBP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mobp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mobp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mobp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MOBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mobp per lo studio della segnalazione di MOBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mobp critici per la funzione di MOBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mobp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MOBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MOBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mobp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MOBP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MOBP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mobp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mobp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.