MOB1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407966-ACT

O MOB1A humano codifica o ativador de quinase MOB 1A, um cofator central da cascata de sinalização Hippo que se liga às quinases LATS1/2 e as ativa para restringir programas transcricionais dependentes de YAP/TAZ. Por meio dessa via, o MOB1A contribui para o controle da progressão do ciclo celular, da apoptose, da polaridade epitelial e da inibição por contato, integrando sinais provenientes da dinâmica do citoesqueleto e das junções célula–célula. Alterações na regulação da via Hippo e a atividade descontrolada de YAP/TAZ estão amplamente implicadas na transformação oncogênica, na metástase e no crescimento tecidual aberrante, o que torna o MOB1A um ponto relevante para estudos mecanísticos de proliferação e diferenciação. A função do MOB1A também é estudada em contextos de respostas ao estresse e de homeostase do tamanho de órgãos, nos quais é necessário um ajuste preciso das saídas transcricionais.

MOB1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOB1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOB1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOB1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOB1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOB1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOB1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOB1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOB1A em células tumorais com expressão de MOB1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.