MO25 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419399

Panoramica

Cab39 codifica la proteina di impalcatura MO25, un partner di legame essenziale per il complesso chinasico LKB1 (STK11) che stabilizza e potenzia allostericamente le chinasi correlate ad AMPK. Attraverso questo ruolo, MO25 contribuisce alla segnalazione di sensing energetico, all’instaurarsi della polarità cellulare e al controllo del metabolismo in risposta allo stress tramite vie collegate ad AMPK e a chinasi affini come i membri delle famiglie MARK e SIK. Nelle cellule di topo, l’alterazione di Cab39 può modificare le reti di fosforilazione che influenzano l’organizzazione del citoscheletro, la polarità epiteliale e i programmi di controllo della crescita coordinati dalla segnalazione dipendente da LKB1. Poiché la disregolazione dell’asse LKB1–AMPK è ampiamente implicata negli squilibri metabolici e nella biologia tumorale, Cab39 è spesso studiato come nodo modulatore che influisce su questi processi nei sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MO25 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cab39 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cab39 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cab39 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MO25.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cab39 per lo studio della segnalazione di MO25, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cab39 critici per la funzione di MO25
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cab39 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MO25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MO25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cab39. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MO25 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MO25 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cab39 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cab39 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.