Plasmide CRISPR/Cas9 KO MO25 (m): sc-419399

Présentation

Cab39 code pour la protéine d’échafaudage MO25, un partenaire de liaison essentiel du complexe kinase LKB1 (STK11), qu’elle stabilise et dont elle renforce de manière allostérique l’activité des kinases apparentées à l’AMPK. Par ce rôle, MO25 contribue à la signalisation de détection de l’état énergétique, à l’établissement de la polarité cellulaire et au contrôle du métabolisme en réponse au stress, via des voies associées à l’AMPK et à des kinases apparentées telles que des membres des familles MARK et SIK. Dans les cellules de souris, la perturbation de Cab39 peut modifier les réseaux de phosphorylation qui influencent l’organisation du cytosquelette, la polarité épithéliale et les programmes de contrôle de la croissance coordonnés par une signalisation dépendante de LKB1. Comme la dérégulation de l’axe LKB1–AMPK est largement impliquée dans les déséquilibres métaboliques et la biologie tumorale, Cab39 est fréquemment étudié comme un nœud modulateur susceptible d’influencer ces processus dans des systèmes modèles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MO25 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cab39 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cab39, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cab39 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MO25.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cab39 pour l'étude de la signalisation de MO25, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cab39 essentiels à la fonction de MO25
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cab39 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MO25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MO25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cab39. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MO25 plasmide HDR (m) et le MO25 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cab39 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cab39 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.