Plásmido CRISPR de Activación (h) Mnt: sc-402720-ACT

El gen humano **MNT** codifica Mnt, un factor de transcripción básico hélice‑bucle‑hélice con cremallera de leucina (bHLH‑LZ) que forma heterodímeros con MAX para unirse a elementos de ADN tipo E‑box y regular programas de expresión génica que controlan el crecimiento celular, el metabolismo y la diferenciación. Como antagonista funcional dentro de la red MYC/MAX/MXD, Mnt ayuda a limitar las salidas transcripcionales impulsadas por MYC, contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis celular y a procesos relacionados con puntos de control. La alteración de la transcripción regulada por MNT se ha vinculado con cambios en la señalización proliferativa y en las respuestas al estrés, con frecuencia relevantes en biología del cáncer y en estudios de especificación de linaje. Dado que Mnt integra la represión transcripcional y la regulación dependiente del contexto a lo largo de vías asociadas a MYC, se estudia ampliamente en modelos de transformación oncogénica y de control génico del desarrollo.

Mnt El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MNT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mnt El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MNT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MNT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mnt. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MNT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mnt en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mnt en células tumorales con expresión de MNT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.