Mnk2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421658

Panoramica

Il gene murino Mknk2 codifica la chinasi serina/treonina interagente con le MAP chinasi 2 (Mnk2), un effettore a valle della segnalazione ERK e p38 MAPK che modula l’inizio della traduzione fosforilando eIF4E e altri componenti correlati del macchinario di traduzione cap-dipendente dell’mRNA. Attraverso questo nodo, Mnk2 integra segnali di stress e mitogenici per modellare la traduzione selettiva degli mRNA, influenzando crescita cellulare, sopravvivenza e risposte infiammatorie. Un’alterata attività dell’asse MNK–eIF4E è stata associata a programmi di sintesi proteica deregolati osservati nella biologia dei tumori e in patologie immuno-mediate, rendendo Mknk2 un utile punto di ingresso per studiare il controllo traduzionale guidato dalle MAPK in modelli murini. L’analisi funzionale di Mnk2 supporta inoltre studi sul cross-talk tra vie di segnalazione, sulle risposte dei geni a espressione immediata e sulla traduzione dipendente dal contesto in condizioni di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mnk2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mknk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mknk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mknk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mnk2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mknk2 per lo studio della segnalazione di Mnk2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mknk2 critici per la funzione di Mnk2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mknk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mnk2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mnk2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mknk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mnk2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mnk2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mknk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mknk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.