Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MLN64 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405166
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLN64 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MLN64, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MLN64 Antibody (H-1): sc-166215
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLN64 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405166 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
STARD3 codifica MLN64, una proteina di membrana dei compartimenti endosomiali/ lisosomiali tardivi contenente un dominio START che media il trasporto intracellulare del colesterolo. MLN64 contribuisce al traffico degli steroli dagli endosomi verso i siti di steroidogenesi e di biogenesi di membrana, collegando la gestione endocitica dei lipidi all’utilizzo mitocondriale del colesterolo e a reti più ampie di omeostasi lipidica. Attraverso effetti sulla distribuzione del colesterolo e sulla dinamica dei contatti tra organelli, l’attività di STARD3 si interseca con vie che controllano la composizione delle membrane, la compartimentalizzazione della segnalazione e le risposte allo stress cellulare. Un’espressione deregolata di STARD3 è stata associata ad alterazioni del metabolismo lipidico ed è stata studiata nel contesto di fenotipi proliferativi e metabolici rilevanti per la biologia dei tumori e la neurodegenerazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MLN64 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STARD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STARD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STARD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MLN64.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STARD3 per lo studio della segnalazione di MLN64, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni STARD3 critici per la funzione di MLN64
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STARD3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MLN64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MLN64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STARD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MLN64 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MLN64 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STARD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STARD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.