MLKL Double Nickase Plasmid (h): sc-401248-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MLKL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MLKL Double-Nickase-Plasmid (h) und MLKL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MLKL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MLKL: sc-293201
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MLKL Double Nickase Plasmid (h) | sc-401248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MLKL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die pseudokinase „Mixed Lineage Kinase Domain-like“ (MLKL) ist ein terminaler Effektor der Nekroptose, der nachgeschaltet der RIPK1/RIPK3-Signalkaskade aktiviert wird, um nach inflammatorischen oder Todesrezeptor-Reizen eine regulierte Permeabilisierung der Zellmembran auszuführen. Nach der Phosphorylierung durch RIPK3 oligomerisiert MLKL und transloziert zu zellulären Membranen, wodurch eine Ionen-Dysregulation und ein lytischer Zelltod gefördert werden, der angeborene Immunantworten mitprägt. Die MLKL-Aktivität überschneidet sich mit TNF-, TLR- und interferongetriebenen Signalwegen und beeinflusst dadurch die Zytokinfreisetzung und Gewebeschädigung bei steriler Entzündung und Infektion. Eine fehlregulierte nekroptotische Signalgebung unter Beteiligung von MLKL wurde in Modellen der Neuroinflammation, der Ischämie-Reperfusions-Schädigung, entzündlicher Darmpathologie und Tumor-Immunsystem-Interaktionen beschrieben, was MLKL zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht.
MLKL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MLKL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MLKL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MLKL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MLKL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.