Mindin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417294

Panoramica

SPON2 codifica mindin, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che funge da molecola di riconoscimento di pattern e di adesione, collegando il sensing dell’immunità innata alle interazioni cellula–matrice. Mindin lega componenti microbici e recettori integrinici, favorendo il reclutamento dei leucociti, l’attivazione dei macrofagi e la modulazione di vie di segnalazione infiammatoria come NF-κB e delle reti di citochine a valle. Nei microambienti stromali e vascolari, SPON2 contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare, alla formazione di gradienti chemiotattici e ai processi di rimodellamento tissutale che influenzano le interazioni tumore–sistema immunitario. Un’espressione deregolata di SPON2 è stata riportata in molteplici contesti infiammatori e oncogenici, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla sorveglianza immunitaria, sul rimodellamento associato alla fibrosi e sulla segnalazione del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mindin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPON2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPON2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPON2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mindin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPON2 per lo studio della segnalazione di Mindin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPON2 critici per la funzione di Mindin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPON2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mindin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mindin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPON2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mindin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mindin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPON2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPON2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.