MICB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401524-ACT

MICBは、MHCクラスIポリペプチド関連配列B（MHC class I polypeptide-related sequence B）をコードしており、ヒト細胞表面に提示されるストレス誘導性リガンドとして、NK細胞および一部のT細胞に発現する活性化受容体NKG2Dに結合します。MICBの発現は、DNA損傷応答、酸化ストレス、感染に伴うシグナル伝達などを含む細胞ストレスプログラムによって調節されており、自然免疫による監視機構を、プロテオスタシスや細胞周期制御の変化と結び付けています。NKG2Dリガンド軸の一要素として、MICBは細胞傷害性リンパ球の活性化やサイトカイン産生に影響する免疫認識経路に関与します。MICBの発現異常やシェディングは、がん生物学および慢性感染モデルにおいて、免疫回避表現型や炎症性シグナル伝達と関連づけられており、腫瘍—免疫相互作用の研究における利用を支持しています。

MICB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MICBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MICB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MICB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMICB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MICBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMICB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMICB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMICB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMICB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。