MICB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401524-ACT

MICB codifica la sequence B correlata ai polipeptidi dell’MHC di classe I, un ligando inducibile dallo stress esposto sulla superficie delle cellule umane che interagisce con il recettore attivante NKG2D sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T. L’espressione di MICB è regolata da programmi di stress cellulare, tra cui le risposte al danno al DNA, lo stress ossidativo e la segnalazione associata alle infezioni, collegando la sorveglianza immunitaria innata ai cambiamenti nella proteostasi e nel controllo del ciclo cellulare. Come parte dell’asse dei ligandi di NKG2D, MICB partecipa a vie di immunoricognizione che influenzano l’attivazione dei linfociti citotossici e la produzione di citochine. Un’espressione o un shedding di MICB deregolati sono stati associati a fenotipi di evasione immunitaria e a segnalazione infiammatoria nella biologia del cancro e in modelli di infezione cronica, a supporto del suo impiego in studi sulle interazioni tumore–sistema immunitario.

MICB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MICB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MICB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MICB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MICB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MICB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MICB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MICB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MICB nelle cellule tumorali con espressione di MICB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.