MIA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403994-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MIA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- MIA3 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal MIA3 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal MIA3 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di MIA3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MIA3 Antibody (C-5): sc-393916
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MIA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-403994-ACT | 20 µg | $397.00 |
La MIA3 umana (melanoma inhibitory activity family member 3), nota anche come TANGO1, è una proteina scaffold residente nel reticolo endoplasmatico (RE) essenziale per organizzare i siti di uscita dal RE e per accoppiare l’assemblaggio del rivestimento COPII alla secrezione di carichi voluminosi. Coordinando il caricamento del procollagene e la biogenesi delle vescicole, MIA3 sostiene la deposizione della matrice extracellulare e l’omeostasi tissutale, collegando la proteostasi del RE alla capacità della via secretoria. Il traffico dipendente da MIA3 si interseca con la biosintesi del collagene, la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response) e i programmi di rimodellamento dello stroma. Un’attività di MIA3 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’organizzazione della matrice e a fenotipi di stress secretorio rilevanti per la fibrosi, difetti dello sviluppo e la biologia del microambiente tumorale.
MIA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MIA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
MIA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MIA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MIA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MIA3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MIA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MIA3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MIA3 nelle cellule tumorali con espressione di MIA3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.