Plasmide CRISPR d'Activation (h) mGluR-2: sc-403054-ACT

GRM2 code le récepteur humain métabotropique du glutamate 2 (mGluR-2), un GPCR couplé à Gi/o qui module la transmission synaptique en inhibant l’activité de l’adénylate cyclase, en diminuant l’AMPc intracellulaire et en régulant la conductance des canaux ioniques. mGluR-2 agit comme autorécepteur et hétéro-récepteur présynaptique afin de limiter la libération de glutamate et de façonner l’excitabilité neuronale au sein des circuits glutamatergiques. Via des processus de signalisation dépendant de l’AMPc/PKA, de MAPK/ERK et du calcium, GRM2 influence la plasticité synaptique, l’équilibre des neurotransmetteurs et les oscillations des réseaux neuronaux. Une dérégulation de la signalisation de GRM2 a été impliquée dans la biologie de maladies neuropsychiatriques et neurodéveloppementales, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques des dysfonctionnements au niveau des circuits.

mGluR-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mGluR-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mGluR-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mGluR-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mGluR-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.