MGAT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415617-ACT

ヒトMOGAT3（MGAT3とも呼ばれる）は、モノアシルグリセロールをアシル化してジアシルグリセロールを生成するモノアシルグリセロール・アシルトランスフェラーゼをコードしており、ジアシルグリセロールはトリグリセリド生合成における重要な中間体です。この酵素活性は、グリセロ脂質のリモデリングを、膜組成、脂肪滴形成、細胞のエネルギー貯蔵に影響するより広範な脂質代謝ネットワークと結び付けます。MGAT3はジアシルグリセロールおよび下流の脂質プールを調節することで、脂質性セカンドメッセンジャーに感受性のあるシグナル伝達過程や代謝ストレス応答とも交差し得ます。グリセロ脂質代謝の制御異常は、代謝性疾患の表現型や脂質異常症に関連する経路と関連しているため、MGAT3はヒト細胞における脂質ハンドリングの機構研究に有用な標的となります。

MGAT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MOGAT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MGAT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MOGAT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMOGAT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MGAT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMOGAT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMGAT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMOGAT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMGAT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。