METTL5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418556

Panoramica

METTL5 codifica una metiltransferasi dell’RNA dipendente da SAM che catalizza la deposizione di N6-metiladenosina (m6A) sull’rRNA 18S, contribuendo a modellare la struttura del ribosoma e l’output traduttivo. Questa modifica è collegata alla biogenesi ribosomiale e alla messa a punto fine dei programmi di sintesi proteica che sostengono la crescita cellulare e l’adattamento allo stress. Una regolazione alterata del macchinario di metilazione dell’rRNA, inclusa l’attività di METTL5, è stata associata a cambiamenti nel controllo della traduzione osservati in fenotipi di neurosviluppo e in stati di espressione genica correlati al cancro. Di conseguenza, METTL5 è studiata in vie che collegano l’epigenetica dell’RNA alla proteostasi, alla progressione del ciclo cellulare e alla differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO METTL5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene METTL5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del METTL5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto METTL5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina METTL5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di METTL5 per lo studio della segnalazione di METTL5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni METTL5 critici per la funzione di METTL5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di METTL5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal METTL5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal METTL5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus METTL5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal METTL5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR METTL5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia METTL5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio METTL5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.