Mena Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420173

Panoramica

Enah codifica Mena (mammalian enabled), una proteina regolatrice dell’actina della famiglia Ena/VASP che promuove l’allungamento dei filamenti e coordina l’accoppiamento actina–membrana in lamellipodi, filopodi e siti di adesione. Mena integra segnali provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho, dalle vie delle adesioni focali mediate da integrine e dagli input dei fattori di crescita, contribuendo a modellare la polarità cellulare, la migrazione e la morfogenesi tissutale. Nei sistemi murini, l’attività di Enah viene comunemente studiata in contesti quali lo sviluppo neurale, il rimodellamento epiteliale e le dinamiche del citoscheletro alla base del comportamento cellulare invasivo. Un rimodellamento dell’actina dipendente da Ena/VASP deregolato è ampiamente associato ad alterazioni dei programmi di motilità cellulare, rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi neuroevolutivi in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mena (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Enah in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Enah insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Enah a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mena.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Enah per lo studio della segnalazione di Mena, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Enah critici per la funzione di Mena
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Enah per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mena CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mena CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Enah. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mena Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mena (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Enah per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Enah definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.