Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
mEH Plasmide Double Nickase (h): sc-404239-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mEH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mEH Double Nickase Plasmid (h) e il mEH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPHX1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mEH Antibody (17): sc-135984
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mEH Plasmide Double Nickase (h) | sc-404239-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mEH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404239-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHX1 umano codifica l’epossido idrolasi microsomiale (mEH), un enzima associato al reticolo endoplasmatico che idrolizza epossidi reattivi in dioli meno reattivi, contribuendo così alla gestione cellulare degli xenobiotici e degli epossidi lipidici endogeni. La mEH partecipa a reti metaboliche di fase I/II che si intersecano con le risposte allo stress ossidativo, l’omeostasi redox e la segnalazione infiammatoria, influenzando vie a valle legate alla capacità di detossificazione. Le variazioni dell’attività di EPHX1 sono studiate nel contesto di una diversa suscettibilità alle esposizioni chimiche e della modulazione di intermedi epossidici bioattivi. Nella ricerca biomedica, EPHX1 viene spesso analizzato per il suo impatto sul fenotipo metabolico, sulla tolleranza allo stress cellulare e sul crosstalk tra vie che interessa la segnalazione dei mediatori lipidici.
mEH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHX1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.