megalin/LRP2 Plasmide Double Nickase (m): sc-420631-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- megalin/LRP2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (m) e il megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lrp2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: megalin/LRP2 Antibody (G-9): sc-515750
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
megalin/LRP2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420631-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Lrp2** codifica **megalina/LRP2**, un recettore endocitico multiligando della famiglia dei recettori LDL, espresso in modo marcato negli epiteli assorbenti come il tubulo prossimale renale e il neuroepitelio. Promuove l’assorbimento e il traffico mediati da clatrina di vitamine, lipoproteine, complessi ormone–carrier e morfogeni, collegando l’endocitosi allo smistamento endosomiale e al processamento lisosomiale. Attraverso interazioni con proteine adattatrici e co-recettori, la megalina influenza la polarità epiteliale, l’omeostasi dei nutrienti e vie di segnalazione che includono i processi mediati da retinoidi, Sonic hedgehog e TGF-β/BMP. L’alterazione della funzione di **Lrp2** viene utilizzata per modellare anomalie dello sviluppo e fenotipi di disfunzione tubulare renale, supportando studi sui meccanismi delle malformazioni congenite e sui difetti di trasporto epiteliale.
megalin/LRP2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lrp2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lrp2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lrp2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lrp2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.