Partículas Lentivirales de Activación (h) MeCP2: sc-401228-LAC

MECP2 codifica la proteína 2 de unión a metil-CpG (MeCP2), un regulador asociado a la cromatina que se une al ADN metilado y modela programas transcripcionales al coordinar la represión y la activación epigenéticas. MeCP2 influye en la diferenciación neuronal, la maduración sináptica y la expresión génica dependiente de la actividad mediante interacciones con complejos correpresores y vías de remodelación de la cromatina. La alteración de la dosis de MECP2 está estrechamente vinculada a fenotipos del neurodesarrollo y cognitivos, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la regulación dependiente de la metilación del ADN y la homeostasis neuronal. En modelos celulares humanos, MECP2 ofrece un punto de entrada manejable para desentrañar el control transcripcional, la dinámica de los estados de la cromatina y las respuestas de vías posteriores en el sistema nervioso.

Las partículas de activación lentiviral MeCP2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MECP2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MeCP2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MECP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MeCP2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MECP2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.