Plásmido CRISPR de Activación (h) MeCP2: sc-401228-ACT

MECP2 codifica la proteína de unión a metil-CpG 2 (MeCP2), un regulador asociado a la cromatina que se une al ADN metilado y configura programas transcripcionales coordinando la represión y la activación epigenéticas. MeCP2 influye en la maduración neuronal, la plasticidad sináptica y la expresión génica dependiente de la actividad mediante interacciones con correpresores y complejos de remodelación de la cromatina, conectando la dinámica de la metilación del ADN con el procesamiento del ARN y la estabilidad del genoma. Una dosis desregulada de MECP2 altera vías del neurodesarrollo y modifica el equilibrio excitatorio–inhibitorio, lo que lo hace muy relevante para estudios del control transcripcional en neuronas y glía diferenciadas. Dado que MeCP2 integra la señalización epigenética con la arquitectura de la cromatina de largo alcance, se utiliza ampliamente como modelo para investigar redes de regulación génica en el sistema nervioso humano.

MeCP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MECP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MeCP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MECP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MECP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MeCP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MECP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MeCP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MeCP2 en células tumorales con expresión de MECP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.