Plasmide Double Nickase (m) MDM2: sc-421611-NIC

Le gène murin **Mdm2** code l’E3 ubiquitine-ligase **MDM2**, un régulateur négatif central de **TP53** qui contrôle la stabilité de p53, sa localisation nucléaire et son activité transcriptionnelle. En favorisant l’ubiquitination de p53 et sa dégradation par le protéasome, MDM2 module les réponses aux dommages de l’ADN, les points de contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et la sénescence au sein de réseaux de signalisation du stress, notamment les voies **ATM/ATR–CHK**. MDM2 interagit également avec la signalisation du stress ribosomal et avec la régulation par rétroaction de l’axe p53, influençant le devenir cellulaire en contexte de stress oncogénique ou génotoxique. Une expression ou une activité dérégulée de **Mdm2** est fréquemment associée à une suppression anormale de la voie p53 et fait l’objet de nombreuses études dans des modèles de tumorigenèse, d’intégrité du génome et d’homéostasie du développement.

MDM2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mdm2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mdm2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mdm2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mdm2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.