MCPIP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401790-ACT

ZC3H12A codifica MCPIP (nota anche come Regnase-1), un’endoribonucleasi legante l’RNA che limita l’espressione dei geni infiammatori promuovendo la degradazione degli mRNA di citochine e chemochine e modulando la biogenesi dei microRNA. MCPIP integra segnali a valle dei recettori dell’immunità innata e delle vie delle citochine, incluse le cascate NF-κB e MAPK, contribuendo a plasmare l’attivazione dei macrofagi, le risposte delle cellule T e la risoluzione dell’infiammazione. Attraverso la regolazione della stabilità dei trascritti e dei programmi di differenziamento delle cellule immunitarie, ZC3H12A è implicato nella disregolazione dell’omeostasi immunitaria osservata in contesti di malattie autoimmuni e infiammatorie croniche. La sua attività interseca anche le risposte allo stress cellulare e la segnalazione correlata all’apoptosi, rendendola rilevante per studi sul danno tissutale associato all’infiammazione e sulle interazioni tra tumore e sistema immunitario.

MCPIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZC3H12A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MCPIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZC3H12A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZC3H12A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MCPIP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZC3H12A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MCPIP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MCPIP nelle cellule tumorali con espressione di ZC3H12A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.