Plásmido CRISPR de Activación (h) MCM6: sc-402146-ACT

MCM6 codifica un componente central del complejo helicasa MCM2–7, que licencia los orígenes de replicación del ADN e impulsa la progresión de la horquilla de replicación durante la fase S. Al coordinar el disparo de los orígenes y las respuestas al estrés replicativo, MCM6 contribuye a la estabilidad del genoma mediante vías vinculadas al control de los puntos de control (checkpoints) y a la señalización del daño en el ADN. La expresión desregulada de MCM6 o una actividad helicasa alterada se asocian con frecuencia con proliferación aberrante, estrés replicativo e inestabilidad cromosómica observadas en múltiples contextos de cáncer. Como factor acoplado a la proliferación, MCM6 se utiliza ampliamente como punto de partida molecular para estudiar el control del ciclo celular, la dinámica de la replicación y los mecanismos de mantenimiento del genoma en células humanas.

MCM6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MCM6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MCM6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MCM6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MCM6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MCM6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MCM6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MCM6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MCM6 en células tumorales con expresión de MCM6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.