Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAVS: sc-400769-ACT

MAVS (protéine de signalisation antivirale mitochondriale) est un adaptateur ancré à la mitochondrie qui relaie la détection des virus à ARN par RIG-I (DDX58) et MDA5 (IFIH1) vers les voies de signalisation de l’immunité innée en aval. Après activation, MAVS nucléise des assemblages de type prion qui recrutent des adaptateurs de la famille TRAF et activent les complexes TBK1/IKK, déclenchant les programmes transcriptionnels d’IRF3/IRF7 et de NF-κB. Cette voie induit des interférons de type I et des cytokines inflammatoires qui modulent la restriction antivirale, l’immunométabolisme et les réponses de mort cellulaire programmée. Une signalisation MAVS dérégulée a été impliquée dans des signatures d’interféron aberrantes et une inflammation chronique, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte des mécanismes d’échappement immunitaire viral.

MAVS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAVS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAVS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAVS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAVS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAVS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAVS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAVS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAVS dans les cellules tumorales présentant une expression de MAVS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.