Mast Cell Protease 5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421601

Panoramica

Cma1 codifica la proteasi 5 dei mastociti murini, una proteasi serinica della famiglia delle chimasi, immagazzinata nei granuli secretori dei mastociti del tessuto connettivo e rilasciata in seguito a degranulazione mediata da FcεRI. La proteasi 5 dei mastociti partecipa al rimodellamento della matrice extracellulare e alla regolazione di mediatori vasoattivi e proinfiammatori attraverso la processazione proteolitica di peptidi e substrati correlati alle citochine, modulando il reclutamento dei leucociti e le risposte tissutali. Tramite queste attività contribuisce alle vie che sottendono l’infiammazione allergica, l’iperreattività delle vie aeree e la fibrosi tissutale, ed è spesso studiata in modelli di infiammazione cutanea e di rimodellamento cardiopolmonare. Un’alterata attività della proteasi 5 dei mastociti è stata associata a cambiamenti nel dialogo crociato tra immunità innata e adattativa e nell’omeostasi dei tessuti di barriera in contesti di malattie infiammatorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Protease 5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cma1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cma1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cma1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mast Cell Protease 5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cma1 per lo studio della segnalazione di Mast Cell Protease 5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cma1 critici per la funzione di Mast Cell Protease 5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cma1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cma1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mast Cell Protease 5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mast Cell Protease 5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cma1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cma1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.