MASP-1/3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421564

Descripción general

Masp1 codifica las proteasas serinas asociadas a la lectina de unión a manosa MASP-1 y MASP-3, enzimas secretadas que participan en la inmunidad innata al regular la vía de las lectinas del sistema del complemento. Mediante la escisión de componentes del complemento y la coordinación con moléculas de reconocimiento de patrones como MBL y las ficolinas, MASP-1/3 influye en la opsonización, la señalización inflamatoria y la comunicación cruzada entre el complemento y procesos relacionados con la coagulación. Además, MASP-3 se ha vinculado al control de la vía alternativa a través de la activación del factor D, situando a Masp1 en una intersección clave de la amplificación del complemento. La activación desregulada del complemento y la actividad alterada de MASP-1/3 se han asociado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes y contribuyen a mecanismos de lesión tisular relevantes para la enfermedad en múltiples sistemas orgánicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MASP-1/3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Masp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Masp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Masp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MASP-1/3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Masp1 para la investigación de la señalización de MASP-1/3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Masp1 críticos para la función de MASP-1/3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Masp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Masp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MASP-1/3 (m) y el plásmido HDR MASP-1/3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Masp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Masp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.