MARCKSL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403985

Übersicht

MARCKSL1 (MARCKS-like 1) kodiert ein aktinbindendes, membranassoziiertes Protein, das über phosphorylierungsabhängige Interaktionen mit Phospholipiden und dem Aktinnetzwerk den Umbau des Zytoskeletts, die Zellform und die Zellmotilität reguliert. Es ist an Prozessen beteiligt, die mit Neuritenauswuchs, Zellmigration und der Dynamik von Zelladhäsionen verknüpft sind, und integriert Signale nachgeschalteter Kinasen wie PKC sowie Signalwege, die die Bildung von Lamellipodien steuern. Eine veränderte MARCKSL1-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten mit Veränderungen des invasiven Verhaltens und von Proliferationsprogrammen in Verbindung gebracht; außerdem wird das Gen in der neuroentwicklungsbiologischen Forschung untersucht, in der Aktinreorganisation eine zentrale Rolle spielt. Diese Eigenschaften machen MARCKSL1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um aktingetriebene zelluläre Phänotypen und die Kopplung von Signalübertragung an das Zytoskelett zu analysieren.

Das MARCKSL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MARCKSL1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MARCKSL1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MARCKSL1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MARCKSL1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MARCKSL1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MARCKSL1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MARCKSL1-Exone abzielen, die für die MARCKSL1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MARCKSL1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MARCKSL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MARCKSL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MARCKSL1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MARCKSL1 HDR-Plasmid (h) und MARCKSL1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MARCKSL1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MARCKSL1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.