Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAL: sc-403024-ACT

Le gène humain **MAL** code une protéolipide tétraspan hautement hydrophobe, enrichie dans des microdomaines membranaires riches en glycosphingolipides et en cholestérol, où elle contribue au trafic vers la membrane apicale, au tri vésiculaire et à la stabilisation de domaines membranaires spécialisés. MAL participe au transport polarisé des épithéliums et est impliquée dans l’organisation des radeaux lipidiques, qui influencent la localisation des récepteurs et la propagation des signaux à la membrane plasmique. Son expression dépend de la lignée cellulaire et de l’état de différenciation, ce qui en fait un marqueur utile des états cellulaires épithéliaux et lymphoïdes, ainsi qu’un outil pour l’étude de la compartimentation membranaire. Une expression dérégulée de MAL a été rapportée dans de nombreux contextes tumoraux et lors du remodelage épithélial, ce qui soutient les recherches visant à comprendre comment des altérations du trafic et de la dynamique des radeaux lipidiques se lient à la signalisation oncogénique et à la polarité cellulaire.

MAL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAL dans les cellules tumorales présentant une expression de MAL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.