Plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGI-1 (h): sc-402283

Présentation

MAGI1 code pour MAGI-1, une protéine d’échafaudage de type guanylate kinase associée à la membrane (MAGUK), enrichie aux jonctions serrées et à d’autres sites de contact cellule–cellule, où elle organise des complexes de signalisation multiprotéiques. En se liant à des composants jonctionnels et à des effecteurs de signalisation via ses domaines PDZ et WW, MAGI-1 contribue à coordonner la polarité épithéliale, la stabilité des jonctions d’adhérence/serrées et la régulation spatiale de voies liées au remodelage du cytosquelette et à la transduction du signal. Une expression modifiée de MAGI1 ou une altération de sa localisation aux jonctions a été associée à une perturbation de la fonction barrière et à des programmes aberrants de migration cellulaire, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans le remodelage tissulaire inflammatoire. MAGI-1 est également utilisée comme nœud pour étudier les interactions (cross-talk) entre l’architecture jonctionnelle et les réseaux de signalisation répondant aux facteurs de croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGI-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAGI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAGI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAGI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MAGI-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAGI1 pour l'étude de la signalisation de MAGI-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAGI1 essentiels à la fonction de MAGI-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAGI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MAGI-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MAGI-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAGI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MAGI-1 plasmide HDR (h) et le MAGI-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAGI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAGI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.