MAF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418170-ACT

Il gene umano **MAF1** codifica un repressore trascrizionale conservato che collega i segnali di nutrienti e di stress all’attività dell’RNA polimerasi III, regolando così la sintesi di tRNA, 5S rRNA e di altri piccoli RNA non codificanti essenziali per la traduzione proteica e la crescita cellulare. L’attività di MAF1 è controllata dalla fosforilazione a valle di mTORC1 e di chinasi correlate, integrando lo stato metabolico con programmi trascrizionali che modellano la proteostasi e l’adattamento allo stress cellulare. Attraverso la sua influenza sulla capacità di traduzione, MAF1 contribuisce a vie che governano proliferazione, bilancio energetico e risposte allo stress. La disregolazione della trascrizione mediata da Pol III e dei suoi regolatori a monte è stata associata a fenotipi oncogenici e metabolici, stimolando studi meccanicistici sul controllo trascrizionale dipendente da MAF1 in contesti rilevanti per la malattia.

MAF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAF1 nelle cellule tumorali con espressione di MAF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.