LTRPC7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402820-LAC

TRPM7 (LTRPC7) codifica un canale-chinasi unico che conduce cationi bivalenti, in particolare Mg²⁺ e Ca²⁺, accoppiando il flusso ionico a un dominio citosolico di chinasi serina/treonina. Regolando l’omeostasi del magnesio intracellulare, la dinamica del citoscheletro e la segnalazione dipendente dal Ca²⁺, TRPM7 influenza processi quali proliferazione e migrazione cellulare, meccanotrasduzione e risposte cellulari allo stress. L’attività di TRPM7 si interfaccia con vie associate all’eccitabilità di membrana e a reti di segnalazione mediate da chinasi che modellano la segnalazione infiammatoria e l’adattamento metabolico. Un’espressione o una funzione deregolata di TRPM7 è stata associata a danno neurologico e neurodegenerazione, rimodellamento cardiovascolare e alterazioni del comportamento di crescita in diversi contesti tumorali, rendendolo un nodo rilevante per studi di genomica funzionale incentrati sulle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale LTRPC7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TRPM7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LTRPC7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TRPM7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LTRPC7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TRPM7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.