LTRPC7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402820-ACT

TRPM7 (LTRPC7) codifica um canal-quinase bifuncional que conduz cátions divalentes, particularmente Mg²⁺ e Ca²⁺, e acopla a homeostase iônica à sinalização intracelular por meio do seu domínio quinase de serina/treonina. A atividade do TRPM7 influencia o potencial de membrana, a dinâmica do citoesqueleto e a adesão e migração celular, integrando-se a vias que regulam proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. Por meio da regulação de processos enzimáticos dependentes de Mg²⁺ e da sinalização ligada a Ca²⁺, o TRPM7 contribui para o controle do metabolismo e da sobrevivência celulares. A expressão ou função desregulada de TRPM7 tem sido associada a alterações de excitabilidade e a programas de remodelamento implicados em modelos de lesão neurológica, na fisiopatologia cardiovascular e em fenótipos de células cancerosas, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em genômica funcional.

LTRPC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPM7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LTRPC7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPM7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPM7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LTRPC7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPM7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LTRPC7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LTRPC7 em células tumorais com expressão de TRPM7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.