LSD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401294-ACT

O KDM1A humano codifica a desmetilase de lisina específica 1 (LSD1), uma desmetilase de histonas dependente de FAD que remove marcas mono- e di-metiladas de H3K4 e H3K9 para regular a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais. A LSD1 atua em complexos correpressores e de remodelamento de cromatina, coordenando a atividade de enhancers e promotores durante decisões de destino celular, proliferação e diferenciação. Por meio de sua integração ao controle epigenético da transcrição, a LSD1 influencia vias ligadas à especificação de linhagem, respostas a dano no DNA e regulação gênica dependente de receptores hormonais. A atividade e a expressão desreguladas de KDM1A/LSD1 têm sido associadas a estados de expressão gênica alterados observados em diversos cânceres e fenótipos do neurodesenvolvimento, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos em modelos de doença.

LSD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LSD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LSD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LSD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LSD1 em células tumorais com expressão de KDM1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.