LOXL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401965-NIC

LOXL1 codifica la lisil ossidasi–like 1, un’ammina ossidasi rame-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa dei residui di lisina in elastina e collagene, promuovendo la formazione di legami crociati covalenti e la maturazione della matrice extracellulare. Attraverso la regolazione dell’elastogenesi e della fibrillogenesi del collagene, LOXL1 contribuisce alla stabilità meccanica dei tessuti, alla segnalazione cellula–matrice e ai processi di rimodellamento legati alla riparazione delle ferite e a vie associate alla fibrosi. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di LOXL1 sono state associate alla disregolazione della matrice extracellulare osservata in disturbi quali la sindrome da pseudoesfoliazione/glaucoma pseudoesfoliativo e fenotipi di rimodellamento del tessuto connettivo. In biologia del cancro e nella ricerca sullo stroma, LOXL1 è studiato per il suo ruolo nell’organizzazione della matrice e per il suo potenziale impatto su microambienti permissivi all’invasione.

LOXL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LOXL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LOXL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LOXL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LOXL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.